靶向小鼠 CREPT 基因 CRISPR/ Cas9 敲除质粒的构建

doi:10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2023. 01. 016

实验动物科学 ›› 2023, Vol. 40 ›› Issue (1): 79-82.DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2023. 01. 016

靶向小鼠 CREPT 基因 CRISPR/ Cas9 敲除质粒的构建

( 1. 北京实验动物研究中心有限公司,北京 102609) ( 2. 中日友好医院,北京 100029)

收稿日期:2021-09-16 出版日期:2023-02-28 发布日期:2023-03-15
通讯作者: 武会娟( 1972—) ,女,研究员,研究方向:疾病动物模型研究. E-mail: wuhuijuan@ blarc. com. cn
作者简介:刘素丽( 1987—) ,女,博士,研究方向:疾病动物模型研发. E-mail:liusuli@ blarc. com. cn

Construction of CRISPR / Cas9 Gene Knockout Plasmids Targeting Mouse CREPT Gene

( 1. Beijing Laboratory Animal Research Center Co. , Ltd, Beijing 102609,China) ( 2. China-Janpan Friendship Hospital,Beijing 100029,China)

Received:2021-09-16 Online:2023-02-28 Published:2023-03-15

摘要/Abstract

摘要： 目的利用规律间隔成簇短回文重复序列 / 相关蛋白 9( CRISPR / Cas9) 系统构建靶向小鼠 CREPT 基因的敲除质粒。方法根据 CRISPR / Cas9 靶点设计原则靶向小鼠 CREPT 基因的 sgRNAs,与体外转录载体 pUC57-sgRNA连接,构建 CREPT 基因敲除质粒;体外切割实验验证设计的 sgRNAs 是否具有活性。结果设计了 3 条 sgRNAs 并分别准确插入 pUC57-sgRNA 载体;体外切割实验结果显示,以上 3 条 sgRNAs 均能够介导 Cas9 蛋白对靶片断进行切割。结论制备了小鼠 CREPT 基因敲除质粒和体外转录的 sgRNAs,为构建 CREPT 基因敲除小鼠模型奠定了重要基础。

关键词: CREPT, CRISPR / Cas9, 基因敲除

Abstract: Objective To construct CRISPR / Cas9 gene knockout plasmids targeting mouse CREPT gene. Method sgRNAs targeting mouse CREPT gene were designed according to the CRISPR / Cas9 target design principles and were cloned into the in vitro transcription vector pUC57-sgRNA to construct CREPT gene knockout plasmids. Result Three sgRNAs were designed and cloned into puc57-sgRNA, in vitro
digestion experiment showed that the above three sgRNAs could mediate Cas9 protein to cleave the target fragments. Conclusion Mouse CREPT gene knockout plasmids and in vitro transcribed sgRNAs were prepared, laying an important foundation for construction of gene knockout mouse model.

Key words: CREPT, CRISPR / Cas9, gene knockout

中图分类号:

Q95-3

刘素丽, 范柠粼, 邹晓辉, 武会娟. 靶向小鼠 CREPT 基因 CRISPR/ Cas9 敲除质粒的构建[J]. 实验动物科学, 2023, 40(1): 79-82.

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